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產(chǎn)品型號(hào)：
更新時(shí)間：2025-08-15
廠商性質(zhì)：代理商
訪(fǎng)問(wèn)量：376
服務(wù)熱線(xiàn)01084640949
產(chǎn)品分類(lèi)
相關(guān)文章
DirectPCR Lysis Reagent (Cell)
細(xì)胞直接PCR裂解液 裂解+PCR一步到位
Cat#301-C/302-C
產(chǎn)品關(guān)鍵詞：
Viagen Biotech; DirectPCR® 直接PCR；PCR genotyping 基因分型；Proteinase K蛋白酶K；301-C/ 302-C；
產(chǎn)品介紹：
Viagen DirectPCR® DNA提取系統(tǒng)是一種單管式快速DNA制備系統(tǒng)，適用于小鼠尾組織、耳組織、卵黃囊及培養(yǎng)細(xì)胞。該技術(shù)采用Viagen Biotech Inc.科學(xué)家研發(fā)的組分，確保提取的DNA可直接用于基因組PCR分型。動(dòng)物組織與細(xì)胞中的某些成分會(huì)抑制PCR反應(yīng)。DirectPCR裂解試劑含有特異性抑制因子，可中和此類(lèi)PCR抑制物。因此，經(jīng)DirectPCR試劑釋放的DNA可直接用于一步法PCR基因分型。DirectPCR試劑不僅能介導(dǎo)生物樣本的快速裂解，其抑制因子還可有效中和粗提液對(duì)PCR擴(kuò)增的抑制活性，同時(shí)最大限度保持釋放的基因組DNA完整性。該裂解液簡(jiǎn)易操作流程避免了溶液轉(zhuǎn)移或開(kāi)管步驟，為您節(jié)省大量額外時(shí)間。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
與傳統(tǒng)方法相比，DirectPCR®系統(tǒng)具有以下顯著優(yōu)勢(shì)：
· 省時(shí)：操作時(shí)間更短，粗提裂解液可直接用于PCR
· 經(jīng)濟(jì)：性?xún)r(jià)比高
· 安全：不含有機(jī)試劑
· 環(huán)保：減少?gòu)U棄物產(chǎn)生（有機(jī)試劑、離心管、槍頭等）
· 穩(wěn)定高效：成功率近100%，且DNA得率高
操作流程：（細(xì)胞直接PCR裂解液）
1. 將10cm培養(yǎng)板中的細(xì)胞懸浮于200-300µl DirectPCR裂解試劑（細(xì)胞）中，試劑需含有新鮮配制的0.2-0.4mg/ml蛋白酶K（Sigma，產(chǎn)品編號(hào)p6556，不包含）。蛋白酶K在DirectPCR試劑中可穩(wěn)定存在約24小時(shí)。如果處理的細(xì)胞數(shù)量較少，難以稱(chēng)量蛋白酶K干粉，可使用基因組PCR級(jí)蛋白酶K溶液（Viagen Cat#501-PK），濃度為0.5-1.0 mg/ml（每1 ml DirectPCR試劑加入25-50µl蛋白酶K溶液）。
注意：對(duì)于少量細(xì)胞，可將DirectPCR試劑用蒸餾水稀釋至多10倍，然后按比例增加裂解液體積用于PCR（見(jiàn)表1）。
2. 將試管置于55℃的旋轉(zhuǎn)雜交爐中旋轉(zhuǎn)5-6小時(shí)，直至無(wú)團(tuán)塊可見(jiàn)。如有需要，可旋轉(zhuǎn)過(guò)夜，效果不會(huì)降低。充分裂解非常重要。為獲得可重復(fù)的結(jié)果，建議在2-3小時(shí)后搖動(dòng)裝有試管的瓶子，重新調(diào)整試管位置。
注意：旋轉(zhuǎn)雜交爐的效果優(yōu)于搖板。對(duì)于少于150 µl DirectPCR試劑（細(xì)胞）的情況，使用0.75 cm試管。長(zhǎng)時(shí)間旋轉(zhuǎn)導(dǎo)致的DNA斷裂不會(huì)顯著影響PCR效果。對(duì)于不同大小的樣本，按比例使用DirectPCR裂解試劑。
3. 將粗裂解液在85°C水浴中孵育45分鐘，將整個(gè)試管架漂浮于水浴上。（可選）在步驟4之前，離心10秒以沉淀雜質(zhì)。粗裂解液可在-20℃保存1年（或在4℃保存1周），效果不會(huì)降低。
4. 每50 µl PCR反應(yīng)使用0.5-1µl裂解液。推薦使用Eppendorf Hotmaster Taq聚合酶（cat#954-14-5018）、Sigma JumpStart Taq DNA聚合酶（產(chǎn)品編號(hào)D9307）或Qiagen HotStar Taq DNA聚合酶（產(chǎn)品編號(hào)203203）進(jìn)行PCR。
DNA回收：粗裂解液中的DNA可回收用于進(jìn)一步分析。加入NaCl至終濃度為250 mM，然后加入0.7體積的異丙醇。DNA將形成沉淀。4℃離心2分鐘，棄上清，用1 ml 70%乙醇洗滌DNA，溶解于50µl 10mM Tris-HCl（8.0）中。取1µl用于PCR。
表1. 培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞建議起始裂解條件
培養(yǎng)板大?。?xì)胞數(shù)量） | 試管大小（ml） | DirectPCR-細(xì)胞（µl） | 稀釋倍數(shù) | 裂解液（µl）/50 µl PCR反應(yīng)體系 |
96孔板* | 0.75 | 50-70 | 1 | 1-1.5 |
96孔板** | 0.75 | 60-80 | 2 | 2-3 |
24孔板* | 0.75 | 70-100 | 1 | 1-1.5 |
6孔板* | 0.75 | 100-140 | 1 | 1-1.5 |
10cm板* | 1.5 | 200-300 | 1 | 1-1.5 |
*使用旋轉(zhuǎn)雜交爐裂解。** 使用搖板裂解。用磷酸鹽緩沖液洗滌96孔板中的細(xì)胞兩次，加入60µl 2倍稀釋的DirectPCR試劑（細(xì)胞）。55℃孵育過(guò)夜。將96孔板置于濕盒中，漂浮于85℃水浴上1.5小時(shí)。多次吸打混勻。取1ul裂解液用于PCR。
訂購(gòu)信息：
品牌 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
Viagen Biotech | DirectPCR Lysis Reagent (Cell)細(xì)胞直接PCR裂解液 | 301-C | 50ml |
Viagen Biotech | DirectPCR Lysis Reagent (Cell)細(xì)胞直接PCR裂解液 | 301-C | 100ml |
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貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 描述 | 規(guī)格 |
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402-E | DirectPCR Lysis Reagent (Ear) 小鼠耳組織直接PCR裂解液 | 500個(gè)小鼠耳朵（50 ml） | 50 ml |
202-Y | DirectPCR Lysis Reagent (Yolk Sac) 卵黃囊直接PCR裂解液 | 卵黃囊（100 ml） | 100 ml |
501-PK | 蛋白酶K溶液 | 所有組織類(lèi)型（100 mg） | 100 mg |
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