破骨細(xì)胞骨吸收功能檢測(cè)

背景簡(jiǎn)介：

破骨細(xì)胞是一種多核的，具有骨吸收功能的骨組織細(xì)胞，在骨吸收過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。破骨細(xì)胞骨吸收功能的異常會(huì)引發(fā)一系列的病癥，如骨質(zhì)疏松癥、關(guān)節(jié)置換術(shù)后假體松動(dòng)、骨硬化癥和牙周病變等。破骨細(xì)胞骨吸收功能的研究對(duì)于各類骨疾病的防治具有重要意義。在破骨細(xì)胞骨吸收研究中，不僅要了解破骨細(xì)胞骨吸收過程，還需要評(píng)價(jià)破骨細(xì)胞的骨吸收功能。骨吸收陷窩形態(tài)分析法，被廣發(fā)用于評(píng)價(jià)破骨細(xì)胞骨吸收功能研究。

檢測(cè)原理：

當(dāng)破骨細(xì)胞粘附在骨基質(zhì)表面，會(huì)在其骨基質(zhì)質(zhì)檢形成一個(gè)局部微酸環(huán)境，進(jìn)而發(fā)揮骨吸收功能兵形成吸收陷窩，即骨吸收陷窩。骨吸收陷窩是破骨細(xì)胞骨銷售的最直接結(jié)果，其數(shù)量，大小和深度能直接反映破骨細(xì)胞骨吸收的能力。骨吸收陷窩形態(tài)分析法是通過對(duì)骨吸收陷窩進(jìn)行形態(tài)計(jì)量分析，來評(píng)價(jià)破骨細(xì)胞骨吸收功能，該方法是目前判斷破骨細(xì)胞骨吸收功能的可靠方法。

北京博蕾德生物技術(shù)有限公司提供用于200um, 400um 厚度破骨細(xì)胞骨吸收功能檢測(cè)Boneslice 骨切片 骨吸收檢測(cè)，適用于96孔板檢測(cè)。

產(chǎn)品描述：

開始骨吸收實(shí)驗(yàn)前用培養(yǎng)基重懸骨切片，成熟或早熟的破骨細(xì)胞，無(wú)論是由外周血單核細(xì)胞（PBMC）或共培養(yǎng)產(chǎn)生的，都可以將細(xì)胞分散覆蓋于骨切片上。根據(jù)破骨細(xì)胞的成熟形態(tài)和影響因素，凹點(diǎn)會(huì)在3-14天出現(xiàn)。破骨細(xì)胞數(shù)量可通過Tracp 活性實(shí)驗(yàn)來觀察，吸收凹點(diǎn)和溝可通過甲苯藍(lán)染色觀察（如圖2.）。

關(guān)鍵詞：骨切片  Boneslice  牛皮質(zhì)骨切片  破骨細(xì)胞 pit assay   凹點(diǎn)實(shí)驗(yàn) Boneslice  骨切片  骨吸收檢測(cè)  

來源：骨切片由牛股骨的皮質(zhì)部分制成，適合96孔板，直徑6mm。

厚度：1）0.2mm（適用于免疫熒光，共聚焦實(shí)驗(yàn)）。

       2）0.4mm（適用于下游分析）

儲(chǔ)存：置于4°C下96%乙醇中。

應(yīng)用：用于骨吸收實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，通過破骨細(xì)胞的骨吸收形成的吸收坑，可以用來監(jiān)測(cè)培養(yǎng)的破骨細(xì)胞的骨吸收情況，適合96孔板。

操作流程：

該方法提供一種易于檢測(cè)的定量方案，用于體外測(cè)定破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨吸收。破骨細(xì)胞接種于骨切片上，吸收坑的形成可以通過甲苯胺藍(lán)染色進(jìn)行定量。

實(shí)驗(yàn)材料和試劑：

1）破骨細(xì)胞

2）骨切片

3）異丙醇

4）甲苯胺藍(lán)（Sigma cat#198161）

5）超純水

6）96孔細(xì)胞培養(yǎng)板（Greiner , Cat#650185）

實(shí)驗(yàn)設(shè)備：

1.       骨形態(tài)測(cè)量系統(tǒng)

2.       超聲波清洗器

操作流程：

1.  破骨細(xì)胞接種于（250000 細(xì)胞/孔）含和不含顱骨成骨細(xì)胞的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上（提前孔內(nèi)放置Boneslice  骨切片  骨吸收檢測(cè)）。

2.  細(xì)胞在合適的培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)至少14天。

3.  此后，用PBS洗滌細(xì)胞兩次，在250ul 70%異丙醇中，用超聲波高功率處理至少15分鐘，使細(xì)胞從骨切片脫落。

注意：250ul 70%異丙醇處理使細(xì)胞更容易從骨切片脫落。

4.  加入100ul 甲苯胺藍(lán)溶液（1%溶解于水），室溫染色2分鐘。

5.  用250ul 超純水沖洗骨切片至少5次，以洗掉切片上的殘留物。

吸收坑被染成深藍(lán)色（圖1），吸收坑面積可以通過骨測(cè)量系統(tǒng)進(jìn)行量化或者吸收坑可通過光學(xué)顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。

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